อธิบายการทดสอบ HPLC

หลักการแยกด้วยโครมาโทกราฟี

ตัวอย่างที่เตรียมแล้วไหลผ่านคอลัมน์ไปกับตัวทำละลาย ซึ่งเรียกว่าเฟสเคลื่อนที่ ส่วนวัสดุภายในคอลัมน์เรียกว่าเฟสอยู่กับที่ องค์ประกอบแต่ละชนิดมีปฏิสัมพันธ์กับทั้งสองเฟสต่างกัน จึงออกจากคอลัมน์ในเวลาต่างกัน เวลานี้เรียกว่าเวลาเก็บกัก

เครื่องตรวจวัดบันทึกสัญญาณตามเวลาเป็นกราฟที่เรียกว่าโครมาโทแกรม พีคบนกราฟแสดงองค์ประกอบที่ตรวจพบภายใต้เงื่อนไขการทดสอบนั้น

จากโครมาโทแกรมสู่ค่าความบริสุทธิ์

การรายงานความบริสุทธิ์มักคำนวณจากพื้นที่พีค โดยเปรียบเทียบพีคหลักกับพีคอื่นที่ตรวจพบ

ค่าที่ได้ขึ้นอยู่กับวิธีวิเคราะห์ กฎการคำนวณพื้นที่พีค การตอบสนองของตัวตรวจวัด ชนิดคอลัมน์ เงื่อนไขของเฟสเคลื่อนที่ และการเตรียมตัวอย่าง

HPLC บอกอะไรได้และบอกอะไรไม่ได้

• การแยกองค์ประกอบที่ตรวจพบได้
• ความบริสุทธิ์เชิงสัมพัทธ์ทางโครมาโทกราฟี
• พฤติกรรมการกักเก็บภายใต้วิธีที่กำหนด
• การมีอยู่ของพีคอื่นที่ตรวจพบ

ผลความบริสุทธิ์ทางโครมาโทกราฟีเพียงอย่างเดียวไม่ยืนยันลำดับ มวลโมเลกุล ความปราศจากเชื้อ เอนโดทอกซิน หรือฤทธิ์ทางชีวภาพ แต่ละข้ออ้างต้องมีการทดสอบที่เหมาะสม

เปอร์เซ็นต์พื้นที่พีคเพียงอย่างเดียวไม่ใช่การวิเคราะห์ปริมาณ HPLC หรือ LC-MS ที่ตรวจสอบความใช้ได้และสอบเทียบอย่างเหมาะสมสามารถวัดปริมาณได้ โดยรายงานต้องระบุวิธีและหน่วย [1]

อะไรทำให้ผล HPLC มีประโยชน์ต่อการอ่านข้อมูล?

วิธีวิเคราะห์ต้องเหมาะกับวัตถุประสงค์ของการทดสอบ การตรวจความเหมาะสมของระบบช่วยแสดงว่าระบบวิเคราะห์ทำงานได้ตามเกณฑ์ วิธีคำนวณพื้นที่พีคและการบันทึกผลก็มีผลต่อความน่าเชื่อถือเช่นกัน [1]

ดังนั้นโครมาโทแกรมและบริบทของวิธีจึงให้ข้อมูลมากกว่าตัวเลขเปอร์เซ็นต์ความบริสุทธิ์ที่ไม่มีเอกสารประกอบ